軍團(tuán)菌病在一年四季均能發(fā)生，夏秋季尤為猖獗。由于沒有有效的疫苗，軍團(tuán)菌的防治主要是阻斷其生長和繁殖，水源管理與定期檢測是目前的主要手段。國際標(biāo)準(zhǔn)化組織把水源中軍團(tuán)菌的檢測作為水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌學(xué)檢查的一部分，我國也出臺了標(biāo)準(zhǔn)《公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范（WS/T394-2012)》，明確要求送風(fēng)指標(biāo)中嗜肺軍團(tuán)菌不得檢出。

需注意的是，環(huán)境中的軍團(tuán)菌主要寄生在原蟲或生物膜中，并借助空氣中的氣溶膠傳播；當(dāng)受到外界不利刺激時（如不利的營養(yǎng)、pH、溫度、消毒劑等）其可進(jìn)入活的非可培養(yǎng)狀態(tài)（viable but non-culturable,VBNC），待條件合適時，又能恢復(fù)活力和致病性。軍團(tuán)菌的傳播性、致病性和環(huán)境隱蔽性給檢測提出了更高要求。綜合來看，要做好有效防治，軍團(tuán)菌的檢測需滿足①即時性，即能夠快速獲取檢測結(jié)果，做到早檢測、早治理，快速阻斷病菌傳播；②全面性，軍團(tuán)菌檢測應(yīng)盡量覆蓋其1-15血清型及潛在的VBNC（活的非可培養(yǎng)狀態(tài)）細(xì)菌；③安全性，應(yīng)最大程度保障檢測人員的安全，并能方便操作，從而擴(kuò)大檢測范圍和頻率。

目前常用的軍團(tuán)菌的檢測方法包括分離培養(yǎng)法、PCR檢測法和膠體金免疫層析法等，這些方法互有優(yōu)缺點，一定程度上滿足了檢測需求。本期軍團(tuán)菌專題為您帶來軍團(tuán)菌常見檢測方法的介紹，旨在為軍團(tuán)菌防控提供幫助。

膠體金免疫層析技術(shù)是一種將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和層析分析技術(shù)等多種方法有機(jī)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫檢測技術(shù)。層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶),運用可目測的標(biāo)記物(膠體金)而得到直觀的實驗現(xiàn)象(顯色)。

膠體金免疫層析技術(shù)近年來實現(xiàn)了快速迭代升級，目前可以便捷、快速、準(zhǔn)確和無污染地進(jìn)行檢測操作，同時有能力檢測VBNC（活的非可培養(yǎng)）細(xì)菌。因此膠體金試紙成為目前進(jìn)行軍團(tuán)菌快速檢測的主要方法之一。

分離培養(yǎng)法是軍團(tuán)菌檢測的傳統(tǒng)方法，以細(xì)菌的生長繁殖并目視觀察到菌落形成等為基礎(chǔ)。由于軍團(tuán)菌營養(yǎng)要求特殊，檢測周期長，需要時間為3~5天，最長可達(dá)到14天。

分離培養(yǎng)法是目前軍團(tuán)菌活菌檢測最常用的方法，被認(rèn)為是檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但該方法存在回收率低（回收率僅>64%）的問題，且在雜菌嚴(yán)重或細(xì)菌處于VBNC狀態(tài)時難以應(yīng)用，檢測所需時間長，不能滿足快速檢測的要求。

酶底物法是一種以細(xì)菌酶檢測技術(shù)為基礎(chǔ)，基于最可能數(shù)（most probable number, MPN）方法的定量檢測方法。嗜肺軍團(tuán)菌利用酶底物試劑中豐富的氨基酸、維生素和其他營養(yǎng)成分迅速生長繁殖，同時會利用額外添加的酶底物反應(yīng)生成一種棕色的指示物使溶液顯褐色或者渾濁。

酶底物法可以單次檢測多個樣本，并能檢測到非常低濃度的待測物質(zhì)，可以選擇特定的底物和酶，從而提高其特異性。但正是由于酶底物法的適用范圍受底物和酶的限制，因此在某些情況下無法適用，受干擾影響大。

酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)，用于檢測樣本中特定抗體或抗原的存在。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。ELISA可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。但酶聯(lián)免疫吸附法本身并不能直接確定產(chǎn)生反應(yīng)的是哪種細(xì)菌，無法對這些成分做出鑒定。同時，ELISA作為一種實驗室技術(shù)，在水體軍團(tuán)菌檢測中通常需要在合格的實驗室環(huán)境下由專業(yè)的檢測人員進(jìn)行操作，以確保結(jié)果的可靠性。

PCR檢測法是基于膜完整性進(jìn)行的檢測?；罴?xì)胞由于具有完整的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，可以將DNA的一些特異經(jīng)膜的結(jié)合染料排除在外，而死細(xì)胞和膜損傷細(xì)胞則無法組織染料的進(jìn)入。EMA-PCR法檢測快速，可特異性區(qū)分死菌與活菌，與熒光定量PCR結(jié)合還可進(jìn)行定量檢測。

PCR法是一種快速、敏感且可靠的檢測方法。但相比傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，PCR法的設(shè)備和試劑成本較高，檢測過程對操作人員的專業(yè)知識有較高要求。且由于PCR法對DNA非常敏感，并不能區(qū)分死菌與活菌，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。再利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光反應(yīng)(黃綠色或桔紅色)，最終利用定量技術(shù)（比如流式細(xì)胞儀）測定含量。

免疫熒光法檢測靈敏，操作簡便，過程安全，但該技術(shù)對樣本的處理和固定要求較高，同時要求檢測單位有相關(guān)儀器設(shè)備。 

[1]翁馨妍,陶駿,陳珅珉. 基于酶底物法對飲用水和非飲用水中嗜肺軍團(tuán)菌的定量測定[J]. 凈水技術(shù),2023,42(S1):110-115.

[2]張雅婕,高艷,牛春燕,張永,劉晉源,何立偉,高斌. 酶底物定量法檢測水中嗜肺軍團(tuán)菌[J]. 環(huán)境衛(wèi)生學(xué)雜志,2023,13(04):286-293.

[3]任萌,張世凱,楊波,王毅,胡征. 嗜肺軍團(tuán)菌膠體金檢測試紙性能評估[J]. 中國生物制品學(xué)雜志,2023,36(03):306-309+314.

[4]任淑敏,趙璐,劉凡,趙輝,劉艷妍,張瑩. 酶底物法定量檢測嗜肺軍團(tuán)菌的應(yīng)用研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2022,32(01):39-41.

[5]GB/T 40392-2021, 循環(huán)冷卻水中軍團(tuán)菌的檢測[S].

[6]夏蘭蘭. 嗜肺軍團(tuán)菌間接ELISA檢測方法的建立[D].濱州醫(yī)學(xué)院,2021.

[7]楊闖,李云峰,張琳. 公共場所水源中軍團(tuán)菌的研究進(jìn)展[J]. 口岸衛(wèi)生控制,2019,24(04):34-37+41.

[8]朱慶義. 軍團(tuán)菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)研究[A]. 中華醫(yī)學(xué)會、中華醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)與免疫學(xué)分會.中華醫(yī)學(xué)會2014全國微生物學(xué)與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C].中華醫(yī)學(xué)會、中華醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)與免疫學(xué)分會:中華醫(yī)學(xué)會,2014:244.

[9]張寶瑩,劉凡,陳遜,葛覃兮,劉航. 應(yīng)用兩種PCR法快速檢測公共場所水環(huán)境中嗜肺軍團(tuán)菌[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(14):1984-1986+1990.

[10]王攀,陳賢君,鐘倩怡,李招云. 三種方法在檢測嗜肺軍團(tuán)菌中的應(yīng)用和評價[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(14):2017-2018.